Noyau d'imagerie cellulaire et moléculaire

La mission de l'installation centrale d'imagerie cellulaire et moléculaire (CMI) du centre Integrative Neuroscience COBRE est de fournir l'infrastructure et les ressources nécessaires pour effectuer l'imagerie cellulaire et moléculaire des biomolécules ainsi que la préparation des médias pour poursuivre la recherche à l'Université du Nevada, Reno ( UNR). L'installation centrale est située au troisième étage du bâtiment Fleischmann Lifesciences dans le département de biologie du College of Science.

L'installation CMI Core donne accès à des instruments de pointe, notamment un nouveau système d'imagerie à deux photons Scientifica HyperScope pour la numérisation des tissus profonds dans le cerveau vivant et des animaux entiers, un système de microscope confocal Leica SP8 équipé d'un LIGHTNING permettant la capture de détails cellulaires et observer la dynamique avec une résolution allant jusqu'à 120 nm, un microscope droit Leica Thunder 3D Tissue, un stéréomicroscope Leica Thunder Model Organism destiné à l'imagerie d'embryons, d'organes et de petits organismes tels que Drosophila et C. elegans, un GE Phosphoimager pour Northern blot , un ChemiDoc BioRad pour le transfert Western, deux instruments de PCR en temps réel BioRad pour des PCR précises et quantitatives, un QIAgility pour la configuration PCR automatisée, un spectrophotomètre GeneSys 180 UV/Vis et un fluoromètre Quibit 4.

D'autres capacités du noyau comprennent des instruments de préparation des milieux et des ressources pour l'élevage de Drosophila et C. elegans utilisés comme organismes modèles.

Emplacement : FA 318 (clé d'accès requise)

La microscopie à deux photons est devenue un outil indispensable pour les neurosciences cellulaires, permettant une imagerie fluorescente à haute résolution des cellules in vitro et in vivo du cerveau vivant et des animaux entiers. Le système HyperScope est un microscope à deux photons sur mesure équipé d'un laser Ti-saphir Mai-Tai eHPDS largement accordable (690-1040 nm), d'objectifs multiples (16x, 20x et 40x), et se dresse sur une planche à pain Thorlabs et table anti-vibrations. Avec la caméra Scientifica SciCam Pro CCD, il est possible d'effectuer une imagerie fonctionnelle de fréquences d'images vidéo de 24 ips (pleine résolution) et 40 ips (binned 2 x 2). L'ensemble détecteur comprend un module PMT décalé vers le rouge et un module GaAsP PMT, ainsi qu'une imagerie par épifluorescence avec des ensembles de filtres pour GFP (extinction 470/40x, émission 525/50m) et mCherry (extinction 560/40x, émission 630/75m). Les miroirs de numérisation dans le chemin d'imagerie peuvent être disposés dans plusieurs configurations en fonction de vos besoins. Avec jusqu'à 3 miroirs en série, vous pouvez choisir entre des arrangements galvo/galvo (GG), résonant/galvo (RG) ou résonnant/galvo/galvo (RGG). Le microscope est équipé d'un entraînement d'axe Z ultra-lisse pour assurer un mouvement sans vibration, l'axe Z étant contrôlé avec un logiciel pour l'acquisition de piles z avec une taille de pas minimale de 0,1 mm. L'ajout d'un positionneur d'objectif Piezo axe z permet une imagerie volumique jusqu'à 400 mm. Le microscope peut être facilement configuré et commuté entre les applications in vitro et in vivo en retirant l'optique de la sous-platine et le bloc de colonne montante. Le système est enfermé dans une cage occultante pour éviter la pollution lumineuse et sonore des échantillons biologiques.

Cette plate-forme comprend un logiciel d'acquisition Scientifica SciScan primé, permettant aux utilisateurs d'intégrer facilement SciScan à des applications personnalisées, telles que LabView et ScanImage. L'interface logicielle ScanImage (Vidrio Technologies) utilisée par Scientifica a été développée par HHMI Janelia Farm spécifiquement pour les applications en neurosciences et est considérée comme le logiciel le plus avancé pour le balayage laser à deux photons sur le marché.

Les principales caractéristiques uniques du Scientifica HyperScope incluent :

Emplacement : FA 324

Le confocal Leica TCS SP8 LIGHTNING permet l'extraction d'informations d'image avec une acquisition à super résolution qui exploite la résolution latérale de sous-diffraction de la microscopie confocale. Il permet de capturer des détails cellulaires et d'observer la dynamique avec une résolution jusqu'à 120 nm, ce qui est proche des capacités du microscope à super résolution STED. Le confocal vertical est capable de collecter simultanément jusqu'à 3 canaux de détection (deux PMT, un HyD) à l'aide de plusieurs lignes laser (diode 405, bleu 488, vert 552, rouge 638 nm). Le confocal est configuré avec un scanner tandem conventionnel (8 kHz), une platine super Z-galvo de type S, plusieurs objectifs (10x, 20x, 25x, 40x, 63x) et repose sur une table anti-vibration. Le confocal est connecté à une station de travail informatique équipée du logiciel Leica LAS-X et d'un écran de 30 pouces.

Les principales caractéristiques du confocal incluent :

Emplacement : FA 324

Les imageurs THUNDER sont une toute nouvelle classe de microscopes à large champ à haute résolution développés exclusivement par Leica Microsystems. Ces imageurs peuvent acquérir des données nettes et des images de haute qualité en supprimant instantanément le flou ou le flou de mise au point inhérent aux échantillons 3D épais qui sont généralement acquis à l'aide de la microscopie à champ large. Ces imageurs raccourcissent également considérablement le flux de travail d'imagerie de l'acquisition d'images à l'analyse des données avec le nouveau logiciel de navigation LAS-X. Le THUNDER Imager 3D Tissue est un microscope vertical motorisé et est équipé d'une caméra DFC 9000 GT/C ultra-rapide, et est idéal pour la culture cellulaire, les tissus, les échantillons fixés et les tissus nettoyés. Le THUNDER Imager Model Organism est un stéréomicroscope M205 FCA destiné à l'imagerie d'embryons, d'organes entiers et de petits organismes.

Les principales caractéristiques de l'imageur de tissus THUNDER 3D incluent :

Les principales caractéristiques de l'imageur THUNDER Model Organism incluent :

Emplacement : FA 312 (salle commune de base/d'équipement, accès par code d'accès requis)

Le Typhoon Phosphoimager est un scanner laser rapide et polyvalent pour des mesures sensibles et quantitatives d'échantillons radio-isotropes marqués. Le Typhoon est un scanner laser à mode variable non confocal offrant une vitesse et une résolution élevées pour une quantification précise des protéines, des acides nucléiques et d'autres biomolécules. Le scanner comprend une autoradiographie "sans film" avec des écrans phosphorescents de stockage. Le laser peut générer des images 16 bits à une résolution de pixel allant jusqu'à 25 μm pour donner une quantification précise dans les gels et les transferts, avec une vitesse élevée pour numériser des gels jusqu'à 240 x 250 mm en moins de 2 min. Deux écrans au phosphore d'une taille de 200 X 250 mm sont disponibles pour l'autoradiographie. Le scanner peut détecter une large gamme d'isotopes dans des échantillons radiomarqués. Directement adjacent au système phosphoimager, il y a un ordinateur PC avec un progiciel qui permet une analyse quantitative et qualitative sur site des images et des données.

Les principales caractéristiques de l'imageur Typhoon incluent :

Emplacement : FA 312 (salle commune de base/d'équipement, accès par code d'accès requis)

Le Biorad Chemidoc est une imagerie simple et performante sur gel et transfert pour la quantification précise d'échantillons de protéines dans des gels et des membranes. Le Chemidoc rationalise le transfert Western dans une approche en cinq étapes en combinant des techniques de transfert traditionnelles avec des outils innovants pour permettre une meilleure quantification des bandes et une évaluation rapide des résultats d'électrophorèse et de la qualité du transfert de transfert avant le transfert Western. Le Chemidoc permet des résultats rapides de transfert Western en aussi peu que 15 min avec un transfert de protéines efficace en 3 min et une imagerie sur gel sans tache en 5 min. Le logiciel embarqué comprend tous les outils d'analyse quantitative et qualitative d'images et de données. Les images prises sur le ChemiDoc peuvent également être directement imprimées.

Les principales caractéristiques du système ChemiDoc incluent :

Emplacement : FA 314 (installation de culture tissulaire, accès par code de porte requis)

Le système de transfert Trans-Blot Turbo combine des techniques de transfert traditionnelles avec du papier filtre et des tampons modernes permettant un transfert rapide des protéines des gels aux membranes avec un temps de préparation minimal. Le système intègre une alimentation à haut ampérage qui dirige le courant entre une anode en titane platiné intégrée et une cathode en acier inoxydable.

Les principales caractéristiques du Turbo-Blotter incluent :

Emplacement : FA 313 (salle d'autoclave)

L'autoclave Integra media permet la préparation rapide et douce d'un milieu de culture de 1 à 10 litres. Un contrôle précis de la température, du temps et de la pression pendant le processus de stérilisation garantit une qualité élevée constante. Le mediaclave peut être utilisé pour la préparation et la stérilisation de nombreux types de milieux de culture, y compris les milieux pour la recherche sur C. elegans. Le large port d'ajout facilite l'ajout en toute sécurité de suppléments avant la distribution. Le mediaclave est relié à une pompe péristaltique logée dans un poste de travail à flux vertical pour remplir les boîtes de Pétri et les flacons.

Les principales caractéristiques du Mediaclave incluent :

Emplacement : FA 312 (salle commune de base/d'équipement, accès par code d'accès requis)

Deux machines de PCR en temps réel Biorad combinent une technologie optique avancée avec un contrôle thermique précis pour fournir une détection sensible et fiable, des cycles de configuration rapides et une surveillance des traces d'amplification en temps réel sur l'écran tactile LCD intégré. Directement adjacent aux deux systèmes de détection qPCR, il y a un ordinateur PC contenant un logiciel facile à utiliser pour l'analyse sur site des données qPCR.

Les principales caractéristiques du CFX96 incluent :

Emplacement : FA 312 (salle commune de base/d'équipement, accès par code d'accès requis)

Le QIAgility est un instrument de paillasse compact qui permet une configuration rapide et de haute précision des expériences de PCR avec un logiciel prêt à l'emploi pour plus de facilité et de commodité. Le logiciel fournit des instructions étape par étape pour la configuration de la table de travail et le calcul automatique de tous les mélanges, éliminant ainsi le besoin de programmer les étapes de pipetage. Sélectionnez simplement le kit et le cycleur, définissez vos objectifs et démarrez la course. Pour plus de flexibilité, le QIAgility est commandé via un ordinateur portable.

Les principales caractéristiques du QIAgility comprennent :

Emplacement : FA 312 (salle commune de base/d'équipement, accès par code d'accès requis)

Le spectrophotomètre GeneSys effectue des mesures UV-Vis quantitatives à haut débit lorsqu'un double faisceau est requis comme position de cellule de référence. Optimisé pour la convivialité et les performances, ce système est doté d'un écran tactile couleur haute résolution et d'un réseau Wi-Fi en option. Le compartiment est un changeur de cellules à 8 positions (standard).

Les principales caractéristiques du GeneSys 180 UV/VIS incluent :

Emplacement : FA 314 (installation de culture tissulaire, accès par code de porte requis)

Le fluorimètre Qubit 4 mesure avec précision la quantité d'ADN, d'ARN et de protéines. Le Qubit associé à un kit de dosage RNA IQ peut distinguer avec précision l'ARN intact de l'ARN dégradé en seulement deux étapes simples. Pour tous les tests Qubit, la concentration ou la qualité de la molécule cible dans l'échantillon est signalée par un colorant fluorescent qui émet un signal uniquement lorsqu'il est lié à la cible, ce qui minimise les effets des contaminants sur le résultat. Les menus à écran tactile faciles à utiliser facilitent la sélection et l'exécution des tests dont vous avez besoin, avec des résultats affichés en quelques secondes seulement.

Les principales caractéristiques du fluorimètre Qubit 4 incluent :

Un technicien de laboratoire/de base (à déterminer) sur le personnel fournit une formation de base et un soutien technique afin d'aider les chercheurs avec tous nos équipements et logiciels. Pour plus d'informations sur le noyau, veuillez contacter le directeur principal Alexander van der Linden, Ph.D. à [email protected].

Pour l'imagerie confocale et à deux photons :

Pour l'imagerie moléculaire et les accessoires :